Ankara çevresinde yetiştirilen yeşil yapraklı sebzelerin Listeria monocytogenes içeriklerinin moleküler teknikler kullanılarak belirlenmesi

Abstract

Listeria monocytogenes, doğada yaygın bulunan ve listeriozis hastalığına neden olan gıda kaynaklı bir patojendir. Enfeksiyonlarının önemli bir bölümü de kirlilik unsuru yüksek sular ile sulanan sebzelerin çiğ olarak tüketilmesi sonucu ortaya çıkmaktadır. Son yıllarda, mikroorganizmaların gıdalardan izolasyonunun kolaylaştırılması ve bu izolatların moleküler olarak tanımlanması amacı ile özgün teknikler uygulanmaktadır. Mikroorganizmaların karışık bir gıda ortamından immünomanyetik partiküller ile yakalanması ve yoğunlaştırılmasında kullanılan immünomanyetik ayırma (İMA) ve araştırılan mikroorganizmaya özgü gen bölgesinin enzimatik olarak çoğaltılması ile izolatların moleküler olarak tanımlanmasının sağlandığı polimeraz zincir reaksiyonu (PZR) yöntemlerinin, günümüzde yaygın olarak kullanıldığı bilinmektedir. Bu projede Ankara ve çevresinden toplanan 164 yeşil yapraklı sebze örneğinde L. monocytogenes’in varlığı araştırılmıştır. Bu amaçla şüpheli L. monocytogenes izolatları İMA yöntemi ile gıda ortamından yakalanarak yoğunlaştırılmış, DNA izolasyonlarının yapılmasının ardından, patojene özgü 250 baz çifti (bç) uzunluğundaki hedef gen bölgesi inlA-ileri ve inlA-geri özgün primer çifti kullanılarak PZR yöntemi ile çoğaltılmış ve böylelikle bu izolatların tanımlanması yapılmıştır. Sonuç olarak, bu gen bölgesine ait bandlar incelendiğinde, 164 adet yeşil yapraklı sebze örneğinin 14 adedinde L. monocytogenes’e özgü patojeniteden sorumlu gen bölgesi gözlenmiş ve patojeninin varlığı moleküler olarak tesbit edilmiştirListeria monocytogenes is a widespread food-borne pathogen in the nature, responsible for listeriosis. One of the most important part of the enfections occurs, when the raw vegetables which are irrigated by the water, having high pollution rate are consumed. In the last years, specific techniques for the isolation of microorganisms from foods and identification of these isolates by using molcular techniques are applied. The immunomagnetic separation (IMS) for the detection and concentration of microorganisms from complex food flora and the polymerase chain reaction (PCR) for the identification of isolated colonies by enzymatically amplification of target gene region specific for the microorganism, are known as the common methods for this aim. In this project, the existence of L. monocytogenes in 164 green leafy vegetables, harvested around Ankara, have been investigated. For this purpose, suspected Listeria spp. were captured and concentrated by IMS. After DNA isolation of selected colonies, the part of target gene of the pathogen with the length of 250 base pair (bp), that is specific for L. monocytogenes was amplified by PCR, with primers; inlA-fwd and inlA-rev, in order to identify these colonies. As a result, after analysis of the bands, it was demonstrated that among 164 diverse green leafy vegetables, in 14 samples L. monocytogenes was determined according to presence of the target gene region, responsible for pathogenity, by using molecular tecniques.